Størrelseseksklusjons-kromatografi (SEC) er en kromatografisk metode som separerer molekyler i væske etter deres størrelse, eller mer riktig deres hydrodynamiske volum. Denne type kromatografi er vanligvis brukt på store molekyler eller makromolekylære komplekser, som proteiner og industrielle polymere. Hensikten er å bestemme størrelsen på molekylene.
Når en vannløsning brukes for å transportere prøven gjennom kolonnen (mobilfasen) er teknikken kjent som gel- filtrasjonskromatografi, i motsetning til navnet gel- permeasjonskromatografi, som anvendes når et organisk løsemiddel brukes som mobilfase.
SEC er en mye brukt polymer-karakterisasjons metode grunnet sin evne til å utarbeide presise molvektresultater for polymere.
SEC bruker en type agarose gel for å skille og analysere proteiner og DNA fra andre molekyler.
Agarose gelen består av et renset agarosepulver som er kokt i en buffer løsning og deretter avkjølt i en gel.
Kolonner som brukes til gel- filtrasjon separerer proteiner etter deres størrelse.
Matriksen i kolonna består av små porøse perler.
Proteinmolekyler som er små nok til å gå inn i hullene i perlene blir forsinket og går saktere gjennom kolonna. Proteiner som ikke kan gå inn i disse hullene, blir vasket først ut av kolonna. Dette betyr at de største molekylene vil separeres først (1).
Figur 1: Separasjon ved størrelses eksklusjons kromatografi (2)
Referanser:
1.Burtis, Ashwood, Burns "Fundamentals of Clinical Chemistry (1996) 4th edition, side 109
2 ."Proteins - Analysis of Structure and Function"
Lastet ned 01.11.11 fra: http://www.uth.tmc.edu/uth_orgs/educ_dev/fellowship/ross/PROTEINSLESSON2.html
Overview
Content Tools