...
Det bakenforliggende prinsippet er basert på Beers lov som sier at mengden lys absorbert av et stoff oppløst i en ikke-absorberende løsning, er direkte proporsjonal med konsentrasjonen til stoffet og lengden på lysveien i cm. Et fotometer måler lysintensiteten uten å ta hensyn til bølgelengden, mens man måler lysintensiteten ved utvalgte bølgelengder innen Spektrofotometri ([2] s. 129)
Fotometer
Lyskilden i fotometeret, som ofte er en xenon-, deterium-, kvikksølv- eller quarts-halogenlampe, sender ut lys som treffer en Monokromator. Ved bruk av prisme- eller gittermonokromator splittes lyset i forskjellige retninger avhengig av bølgelengden. Lyset med den ønskede bølgelengden går gjennom en kyvette som inneholder et substrat/en prøveløsning og videre igjennom et filter som fjerner strølys, før det til slutt treffer detektoren. Fotometeret måler intensiteten på lyset som blir absorbert av prøveløsningen/det lyset som transmittert gjennom prøveløsningen for så å gjøre den målte energien i detektoren om til en lesbar størrelse på fotometerets skjerm eller eventuelt tilhørende pc. Det lyset som slipper gjennom prøveløsningen i kyvetta, kalles transmisjonslys, mens det lyset som blir tatt opp i løsningen (absorbert) kalles absorbans.
Alle stoffer har sin egen Absorbtivitetskonstant (bokstaven 'a' i Beers lov) som bestemmer hvilke bølgelengder stoffet vil leses av ved, og denne bølgelengden måles i nm (nanometer).
Figur 1: Viser lysspekteret, og de bølgelengdene der de forskjellige typene av lys befinner seg.
Tabell 1: viser fargene i det synlige spekteret, med bølgelengde- og frekvensintervall
...
Refleksjonsfotometri blir brukt ved tørrkjemimålinger. I disse målingene måler en lyset som blir reflektert av en reaksjonsblanding. Lyset reflektert fra prøven blir sammenlignet med intensiteten av lys fra en referanseoverflate. Da forholdet mellom konsentrasjon og refleksjon av analytten ikke er lineært, brukes Kubelka-Munk ligningen eller Clapper-Wiliams transformasjonen for å konventere dataene til ett lineært format. ([1] s 71)Direkte fotometri: Kan brukes for å måle proteinkonsentrasjonen i biologiske prøver. Dette gjøres ved å måle absorbans ved 200- 225 nm og 270- 290 nm, i UV-spekteret ([1] s313).
...
ReferanserBøker:
- [1] Burtis, Ashwood, Bruns: Tietz, Fundamentals of Clinical Chemistry, 6'th edition, Saunders elsevier.
- [2] Turgeon, Mary Louise: Linné & Ringsrud's, Clinical Laboratory Science The Basics and Routine Techniques, 5'th edition, Mosby Elsevier, 2007.
...
- Figur 1: http://www.insatech.com/article/UV%20absorption. Hentet 24.09.2014.
- Tabell 1: Wikipedia hentet: 28.09.2011