Kromatografi er et fellesnavn på en stor gruppe separasjons- og analysemetoder som baserer seg på at stoffene som skal adskilles skiller seg basert på stoffenes kjemiske og fysiske egenskaper. Kromatografi er nyttig hvis man vil kvantifisere stoffene i en prøve og analysere hvert enkelt stoff kvalitativt.
Felles for alle separasjonsmetoder innen kromatografi er den stasjonære og den mobile fasen. Den stasjonære fasen består av stillestående partikler som har til oppgave å "holde igjen" analyttene. Evnen til å holde igjen analyttene har sammenheng med stoffenes affinitet (tiltrekning mellom kjemiske stoffer). De stoffene som har størst affinitet til stasjonærfasen, vil holdes tilbake i lengre tid og kommer senere ut av kolonnen. Mobilfasen har som oppgave å transportere analyttene gjennom stasjonærfasen, som består av en "seng", lag, eller kolonne. I kromatografi, ser man på de forskjellige analyttene sin evne til å passere den stasjonære fasen sammen med mobilfasen. Et spesifikt stoff sin retensjonstid (tiden det bruker på å passere den stasjonære fasen) vil alltid være det samme, men forskjellige stoffer vil ha forskjellige retensjonstider, og man kan derfor måle konsentrasjonen av hver enkelt etter som de kommer ut av den stasjonære fasen.
Forskjellige kromatografimetoder
- Gasskromatografi (GC)
- Adsorpsjonskromatografi
- Ionebyttekromatografi
- Tynnsjiktskromatografi
- HPLC
Figur 1: Inndeling av kromatografiske metoder
Eksempel
Man vil vite hvor mye koffein man har i en prøve med energidrikk. Fargen og absorbansen til alle stoffene i energidrikken vil interfere med avlesningen hvis man analyserer energidrikken spektrofotometrisk. Det er da nyttig å bruke kromatografi for å separere stoffene. Man bør først anaylsere rent koffein som kontroll for å finne ut retensjonstiden (tiden stoffet bruker gjennom stasjonærfasen). Man kan så analysere prøven. Koffeinen i prøven vil ha samme retensjonstid som kontrollen og man kan så kvantifisere mengde koffein i prøven.
Referanser
1. Textbook of Clinical Chemestry, 1 ed. - Norbert W. Tietz - Side 135.
2. http://no.wikipedia.org/wiki/Affinitet - 08.11.12.
3. Tietz Fundamentals of Clinical Chemistry 6 ed. Carl A. Burtis, Edward R. Ashwood, David E. Burns - side 112-113