CMIA er en forkortelse for chemiluminescent microparticle immunoassay, eller på norsk kjemiluminescensmikropartikkel-immunokjemisk analyse (videre omtalt som CMIA).
Prinsippet bak CMIA baserer seg på spesifikke egenskapene til antigener og antistoffer.
Paramagnetiske mikropartikler som er bekledd med et bindemolekyl (antigen, antistoff eller virale partikler) som er spesifikk for analysen. Disse paramagnetiske mikropartiklene tilsettes prøven og en vortekser blander reaksjonsblandingen, og den innkuberes. Under innkuberingen vil bindemolekylet finne den spesifikke analytten og danne et immunkompleks. Grunnet de magnetiske egenskapene til de paramagnetiske mikropartiklene vil de tiltrekkes en magnet, og dermed kan resterende ubundne partikler vaskes bort. Etter vask tilsettes et kjemiluminescens, acridinmerket konjugat, som binder seg til immunkomplekset i reaksjonsblandingen. Reaksjonsblandingen blir så videre innkubert, før ny vask utføres for å fjerne overflødige partikler. Videre tilsettes en pretriggerløsning, som i hovedsak består av hydrogenperoksid (H2O2). Pretriggerløsningen lager et surt miljø som forhindrer at mikropartiklene klumper seg og at man får en for tidlig lysemisjon. Hydrogenperoksid spalter acridium fra konjugatbindingen til mikropartikkelkomplekset og dermed klargjør det til neste trinn i prosessen. Det tilsettes så triggerløsning, som inneholder natriumhydroksid (NaOH). Grunnet det basiske miljøet og hydrogenperoksid blir acridium oksidert. Oksidasjonen danner N-metylacridon som er ustabilt og frigir energi for å kunne gå tilbake til grunntilstand. Energien frigis i form av lysemisjon. Emisjonslyset er proporsjonalt med konsentrasjonen av analytt i prøven, og avleses av det optiske målesystemet.
Den optiske målingen er en prosess der man gjør RLU-avlesninger og så konverterer dem til assayspesifikke analyttkonsentrasjonsenheter eller kvalitative interpretasjoner for indeksassayer. RLU er en engelsk forkortelse for relative light unit, som på norsk blir relativ lysenhet. RLU er et direkte signal av analyttkonsentrasjonen i prøven, da signalet er direkte avhengig av konsentrasjonen. Etter tilsats av triggerløsning vil det optiske systemets prosesseringsmodul dirigere kjemiluminescensemisjonen fra RV-cellene til CMIA-detektoren. Det foretas en bakgrunnsmåling før triggerløsning tilsettes, denne målingen trekkes fra den aktuelle avlesningen for å korrigere for eventuelt strølys. Formel 1.1 beskriver hvordan man oppnår endelig RLU-måling.
| Endelig måling (RLU) = Aktivert avlesning - Bakgrunnsmåling | Formel 1.1 |
Selve målingen foregår inne i en lukket seksjon og sammen med bakgrunnsmåling blir mengden strølys blir minimal. Gjennom et lysrør ledes emisjonslyset til detektoren som leser av fotonmengden som prøven sender ut, over en bestemt tidsperiode. Dette signalet konverteres til RLU, som videre blir omregnet til konsentrasjon.
Referanser
- Brukermanual Architecti2000SR