ALP 4-nitrofenylfosfat-metode

ALP står for alkalisk fosfatase, og er et hydrolytisk enzym som katalyserer en stor andel av naturlige og syntetiske substrater.
4-nitrofenylfosfat er det mest anvendte substratet for å bestemme ALP aktiviteten. P-nitrofenylfosfat er det gamle navnet til substratet.

ALP katalyserer hydrolyse av 4-nitrofenyl fosfat ved pH 10,4, og får et fargeomslag fra blank til gul.[1]
Dette vist ved denne likningen:

_{Figur 1: Reaksjon for ALP 4-nitrofenylfosfat [2]}

 Ved bruk av et spektrofotometer måles enzymets aktivitet ved å se på dannelse av 4-nitrofenol ved en bølgelengde på 405 nm. Mengden 4-nitrofenol målt fotometrisk i prøven vil da være proporsjonal med den katalyserte konsentrasjonen av ALP tilstede i prøven.[3]

Til denne analysen brukes heparinplasma eller serum. Serum som nettopp er tatt bør helst stå i romtemperatur, og analyseres innen 4 timer.[4]
Preanalytiske faktorer som vil være avgjørende for resultat i analysen:

• Valg av prøveglass

- Kompleksdannere som EDTA, citrat vil binde kationer som Mg²⁺ og Zn²⁺ som er viktig for måling av ALP. Dette vil føre til feil resultat.

• Ved frysing

- Prøven bør tines 18-24 timer før analysering. Dette for å unngå feil resultat.[5]

_{Tabell 1: Referanseområder[6]}

Referanser

1. Tietz fundamentals of clinical chemistry – Carl A. Burtis, Edward R. Ashwood, David E. Bruns. Sixth edition. Saynders (W.B) Co Ltd 2007. ISBN: 9780721638652.
2. http://www.atlas-site.co.uk/index_files/website/$8.05.03.1.0060%20Alkaline%20Posphatase%204x15ml%20S06.pdf
3. http://sv.rilpedia.org/wiki/Enzymkopplad_immunadsorberande_analys
4. [1] Tietz s. 326
5. [2] http://sv.rilpedia.org/wiki/Enzymkopplad_immunadsorberande_analys (25.09.2011 kl. 1221)
6. [3] http://www.atlas-site.co.uk/index_files/website/$8.05.03.1.0060%20Alkaline%20Posphatase%204x15ml%20S06.pdf(25.09.2011 kl. 1226)
7. [4] Tietz s. 326
8. [5] Tietz s. 326
9. [6] Tietz s. 327, tabell 19-4