Introduksjon
Densitometri er en kvantitativ måling av optisk tetthet i lys-sensitive materialer og en instrumentell metode for måling av absorbans, reflektivitet eller fluorescens for hver separerte fraksjon på en elektroforesestrip i et optisk målesystem. Etter elektroforeseseparasjon og farging av en elektroforesegel er det ved hjelp av densitometri mulig å kvantifisere individuelle soner, enten som prosent av total- eller som absolutt konsentrasjon. For eksempel kan man ved kjent totalproteinkonsentrasjonen finne konsentrasjonene til de ulike proteinene i en prøve.
Se også
Proteinelektroforese
Elektroforese - prinsipp
Måleprinsipp
Et densitometer brukes for måling av optisk tetthet eller reflektivitet. Optisk tetthet er et mål på hvor mye av lyset som slipper gjennom prøven. Et slikt densitometer er hovedsakelig en lyskilde plassert mot en fotoelektrisk celle. Det bestemmer den optiske tettheten av en prøve plassert mellom lyskilden og den fotoelektriske cellen (se figur) ved å måle lysintensitetens endring.
Vanlige trekk hos en densitometer er:
- Evnen til å scanne gel 25 til 100 mm i lengde
- Automatisk økningskontroll, som justerer for de mest intense toppene av en elektroferogram til fullt skala
- Stiller inn bakgrunnen til null automatisk, slik at det laveste toppen i elektropherogramen blir 'baseline' slik at mindre topper ikke går tapt eller blir "skjært vekk"
- Justerbar bølgelengde område fra 400 til 700 nm
- Spaltestørrelser kan også endres for å gi større/mindre strålegang
- Integrering for både manuelt og automatisk seleksjon av avlesningsområder mellom topper
- Evnen til å måle UV fluorescens
 |
| Enkel skisse av hvordan prinsippet bak densitometer virker |
Densitometere for måling av prøvens reflektivitet eksisterer også, og måler mengde lys reflektert av en prøves overflate.
I et densitometer brukt for kvantitering av elektroforese blir gelen ført forbi et optisk målesystem og absorbansen til hver fraksjon kommer opp på displayet som en graf. Arealet under hver topp blir automatisk integrert for å gi en kvantitativ måling.
Nødvendig for en pålitelig analyse:
- Lys med riktig bølgelengde.
- Lineære svar fra instrumentet
- Transparent bakgrunn på stripen (gelen, mediumet) som blir scannet
Lineære svar kan forsikres med at man scanner en "blank" strip som har separerte eller sammenhengende soner med ulik tetthet, som stiger lineært, og har en kjent forventet absorbans.
Kilder
Tietz Fundamentals of Clinical Chemistry, 6th edition, Burtis, Ashwood and Bruns. Side 105
http://en.wikipedia.org/wiki/Densitometer
http://no.wikipedia.org/wiki/Optisk_tetthet
http://en.wikipedia.org/wiki/Densitometry
http://snl.no/densitometer/m%C3%A5ler_for_optisk_tetthet